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中性轉化酶(NI)測試盒測定意義：

蔗糖轉化酶(Invertase，Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據最適 pH，將高等植物Ivr分為酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI)兩種類(lèi)型。                          

NI主要存在于細胞質(zhì)中，負責分解細胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。

測定原理：

NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內510nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過(guò)光吸收增加速率來(lái)計算NI活性

自備用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長(cháng)到570 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A標準管。顯色后務(wù)必在30min內測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內測完。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

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