ELISA的基本原理
酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）顧名思義就是以酶作為標記指示物、以抗原抗體免疫反應為
基礎的固相吸附測定方法。因此，一個(gè)ELISA測定試劑，其有機組成部分包括三個(gè)方面，即固相支持物及包被的抗原或抗體、酶標記的抗體或抗原和酶反應底物等。抗原或抗體的固相化并不影響其免疫結合活性，酶標記的抗體或抗原亦是如此，并且標記酶的活性不因標記過(guò)程而喪失。整個(gè)測定中，抗原抗體結合反應在固相支持物上進(jìn)行，反應結果的判斷以酶與其底物作用后的顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光反應為準則，顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光的強度與臨床標本中待測物的濃度成正比或反比關(guān)系。目前國內的ELISA試劑盒均以酶的顯色反應來(lái)完成測定。
固相上抗原抗體相互作用的免疫化學(xué)
固相上抗原抗體結合反應所需要的時(shí)間 通常，固相免疫測定如ELISA中抗原抗體結合達到平衡所需要的時(shí)間，要大于液相免疫測定，并隨液體所占體積與界面抗體或抗原受體所占體積比的增加而增加。當在微孑L板孔內進(jìn)行免疫測定時(shí)，界面反應動(dòng)力學(xué)顯示其對擴散作用有很強的依賴(lài)性，擴散性越強則反應所需時(shí)間越短，結合越充分。這一點(diǎn)可通過(guò)旋轉振蕩來(lái)達到，微孔的旋轉振蕩可促使液體進(jìn)入到可與抗體或抗原包被界面接觸的較小的區域內。也可在微孔中放一個(gè)惰性的塞子以使反應液體成為一個(gè)小體積，或使用一個(gè)具有大表面的多孔的基質(zhì)如硝酸纖維素，或使用微顆粒來(lái)做到這一點(diǎn)。微顆粒小于lum時(shí)，在測定時(shí)即成膠體懸液，而當顆粒或珠較大時(shí)，則會(huì )在沒(méi)有振蕩時(shí)，由于重力的作用而分開(kāi)。所有上述方法均是通過(guò)減少液體所占體積與界面抗體或抗原受體所占體積比，從而減少固相免疫測定的擴散依賴(lài)性。
反應體積 此處的反應體積并非是微孔中的液體體積，而是固相免疫測定中與固相包被的抗體或抗原有接觸的部分，這部分體積到底有多少，很難測定，但比反應管中總液體體積要少得多。固相抗原抗體反應發(fā)生于液體—固相界面，可能處于一級結合鍵的引力距離內，小于10nm。液相中待測抗原或抗體要進(jìn)入到這個(gè)結合界面，需要擴散或質(zhì)量轉移。微顆粒的反應表面區域較微孑L要大得多，因而處于抗原抗體結合界面的體積占總反應體積的比例亦高得多。因此，結合反應的效率更高。這也是全自動(dòng)化免疫測定分析儀均采用微顆粒固相的重要原因之一。可參與結合反應的抗體或抗原的濃度取決于可參與結合的反應體積，這無(wú)法計算。這一點(diǎn)使得使用通常的質(zhì)量作用定律圖形的Keq的計算變得復雜化，因此，固相抗原抗體反應的KeQ值與液相抗原抗體反應的Keq值沒(méi)有可比性。
微孔內特異抗體的免疫測定 使用吸附的復雜抗原進(jìn)行微孔內特異抗體的免疫測定，
與液相測定相比，有明顯的親和力依賴(lài)性，固相受體—配體相互作用的穩定性似乎與微孔內特異抗體的免疫測定親和力依賴(lài)性和極低比例的所捕獲的總抗體相矛盾
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